New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluomeascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit(Fluorescent RT-PCR Su'esu'e Metotia)
【Packaging specifications 】25 Su'ega/Pusa
【Intended ustausaga】
O lenei pusa o loʻo faʻaaogaina mo le suʻesuʻeina lelei o le nucleic acid mai le coronavirus fou i totonu o le nasopharyngeal swabs, oropharyngeal (fa'i) swabs, nasal swabs i luma, mid-turbinate swabs, nasal wash and nasal aspirates mai tagata taʻitoʻatasi o loʻo masalomia ile COVID19 e le latou tausi soifua maloloina. Ole su'esu'eina ole ORF1ab ma le N genes o le coronavirus fou e mafai ona fa'aoga mo su'esu'ega fesoasoani ma mata'ituina fa'ama'i ole fa'ama'i fou ole coronavirus.
【Principles of the procedure 】
O lenei pusa ua mamanuina mo suʻega TaqMan faʻapitoa ma faʻamatalaga faʻapitoa na fuafuaina mo le tala fou coronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab ma N faʻasologa o kenera. Ole tali ole PCR o lo'o i ai seti 3 o fa'amaufa'ailoga fa'apitoa ma su'esu'ega fa'alelei mo le su'esu'eina ma'oti o fa'amoemoega, ma o se seti fa'aopoopo o fa'amatalaga fa'apitoa ma su'esu'ega fa'alelei o lo'o fa'aaogaina e fai ma fa'atonuga fa'alotoifale o le pusa mo le su'eina o genes tau fale.
O le mataupu faavae o le suega e faapea o le suʻesuʻega fluorescent patino e digested ma faaleagaina e le gaoioiga exonuclease o le enzyme Taq i le PCR tali, ina ia tuueseese le vaega fluorescent tusitala ma le vaega fluorescent tineia, ina ia mafai e le faiga mataituina fluorescence e mafai ona maua se fluorescent. faailoilo, ona e ala lea i le aafiaga faatamaoaigaina o le PCR amplification, o le fluorescence faailoilo o le suʻega e oʻo atu i se faʻailoga faʻamaufaʻailoga taua-Ct tau (Tamilosaga threshold). I le tulaga o le leai o se amplicon taulaʻi, o le vaega fai lipoti o le suʻega e latalata i le vaega tineia. I le taimi nei, e tupu le felauaiga o le malosi o le fluorescence resonance, ma o le fluorescence o le vaega fai lipoti e tineia e le kulupu tineia, ina ia le mafai ona iloa le faailo o le fluorescent e le masini PCR fluorescent.
Ina ia mataʻituina le faʻaaogaina o reagents i le taimi o le suʻega, ua faʻapipiʻiina le pusa i le lelei ma le le lelei o le pulea: o le pulea lelei o loʻo i ai le plasmid recombinant nofoaga autu, ma o le pulea le lelei o le vai faʻafefe, lea e faʻaaogaina e mataʻituina ai le faʻaleagaina o le siosiomaga. E fautuaina le setiina o se pulea lelei ma se pulega le lelei i le taimi e tasi pe a suʻeina.
【Main components 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componants | |
Name | Fa'amatalagafa'amaonia | Quantlenei | Quantlenei | |
Pulea lelei | 180 μL/vai | 1 | 1 | Plasmid fau fau, Vai fa'amama |
Le pulea lelei | 180 μL/vai | 1 | 1 | Vai fa'amama |
SARS-Cov-2 Mix | 358.5 μL/vai | 1 | / | Fa'atasiga fa'apitoa, su'esu'ega fa'ama'i fa'ama'i, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Vai fa'amama, ma isi. |
Enzyme Mix | 16.5 μL/vai | 1 | / | Taq enzymes, reverse transcriptase, UNG enzymes, ma isi. |
SARS-Cov-2 Mix(Lyophilised) | 25 suʻega / vial | / | 1 | Ta'ifa'atasiga fa'apitoa, su'esu'ega fa'alelei fa'amatalaga, dNTPs, Taq enzymes, fa'aliliuina transcriptase, Vai fa'amama, ma isi. |
2x Taofi | 375 μL/vai | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Vai fa'amama, ma isi. |
Manatua:(1) E le mafai ona fefiloi pe fesuia'i vaega i pusa eseese.
(2) Sauni sau lava reagent: Nucleic acid extraction kit.
【Storage conditions ma expiration date 】
For BST-SARS-25:Felauaiga ma teuina ile -20±5℃ mo se taimi umi.
For BST-SARS-DR-25:Felauaiga ile vevela ole potu. Teu i le -20±5 ℃ mo se taimi umi.
Aloese mai ta'amilosaga fa'a'aisa-liu fa'afia. Ole taimi fa'ataga e fa'atulaga fa'afuase'i mo le 12 masina.
Va'ai le fa'ailoga mo le aso o le gaosiga ma le fa'aoga.
A maeʻa le tatalaina muamua, e mafai ona teuina le reagent i le -20±5 ° C mo le sili atu i le 1 masina poʻo seʻia oʻo i le iʻuga o le vaitaimi o le reagent, poʻo fea lava le aso e sau muamua, e aloese ai mai le toe faʻafefeteina-liliu faʻasolosolo, ma le numera o le reagent faʻamalo. -e le tatau ona sili atu i le 6 taimi le liu liu.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Applicable faʻataʻitaʻiga ituaiga: Aveesea nucleic acid solution.
2. Faʻataʻitaʻiga teuina ma felauaiga: Teu i-20±5 ℃ mo masina 6. Faʻasaʻo ma faʻafefete faʻataʻitaʻiga e le sili atu i le 6 taimi.
【Tfa'atatauing method】
1.Nucleic acid extraction
Filifili se pusa e fa'aoso ai le nucleic acid talafeagai e aveese mai ai viral nucleic acid, ma mulimuli i fa'atonuga o pusa fa'atatau. E fautuaina le fa'aogaina o se pusa fa'amama o le Nucleic acid na gaosia e le Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. po'o se pusa fa'amamāina o le nucleic acid.
2. Reaction fuant preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Aveese le SARS-Cov-2 Mix and Enzyme Mix, fa'afefiloi atoa ile vevela ole potu fa'afefiloi lelei ile Vortex masini ona fa'a'ese'ese pu'upu'u.
(2) 16.5uL Enzyme Mix na fa'aopoopo i le 358.5uL SARS-Cov-2 Mix ma fa'afefiloi mae'ae'a ina ia maua ai le vaifofo fefiloi.
(3) Sauni se paipa mama 0.2 mL PCR octal ma maka i le 15uL o le vaifofo fefiloi o lo'o i luga i le vaieli.
(4) Faʻaopoopo le 15 μL o vaifofo faʻamaʻi nucleic acid, le pulea lelei ma le le lelei, ma ufiufi ma le faʻaeteete le pulou octal tube.
(5) Faafefiloi lelei e ala i le feliuliua'i i lalo, ma fa'avave le centrifuge e fa'atumauina le vai i le pito i lalo o le paipa.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Faaopopo le 375ul 2x Buffer i le SARS-Cov-2 Mix((Lyophilised) e saunia ai le fefiloi tali. Faafefiloi mae'ae'a e ala ile paipa ona centrifuge pu'upu'u. (A mae'a loa ona saunia le fa'afefiloiga tali, e fautuaina e teu ile -20℃ ile teuina umi.)
(2) Sauni se paipa mama 0.2 mL PCR octal ma maka i le 15μL o fa'afefiloi fa'afefiloi i le vaieli.
(3) Faʻaopoopo le 15μL o le vaifofo faʻamaʻi nucleic acid, le pulea lelei ma le le lelei le pulea, ma ufiufi ma le faʻaeteete le pulou octal tube.
(4) Faafefiloi lelei e ala i le feliuliua'i i lalo, ma fa'avave fa'acentrifuge e fa'atumauina le vai i lalo ole fa'agaau.
3. PCR amplification (Fa'amolemole tagai ile tusi lesona meafaigaluega mo le fa'agaioiga.)
3. 1 Tuu le PCR 8-tube i totonu o le potu faʻataʻitaʻiga o le meafaifaʻaili PCR fluorescent, ma seti le faʻataʻitaʻiga e faʻataʻitaʻiina, o le pulea lelei ma le leaga e tusa ai ma le faʻatonuga o le utaina.
3.2 Auala e iloa ai le fa'amu
(1) ORF1ab gene e filifilia le auala e iloa ai le FAM (Faitala: FAM, Quencher: Leai).
(2) N gene e filifilia le auala e iloa ai le VIC (Faitala: VIC, Quencher: Leai).
(3) O le kenera masani i totonu e filifilia le auala e iloa ai le CY5 (Faitala: CY5, Quencher: Leai).
(4) O le Passive Reference ua seti i le ROX.
3.3 PCR polokalame fa'atulagaina parakalafa:
Laa | vevela(℃) | Taimi | Numera o taamilosaga | |
1 | Fa'aliliuga fa'aliliuga tali | 50 | 15 minu | 1 |
2 | Taq enzyme activation | 95 | 2.5 min | 1 |
3 | Taq enzyme activation | 93 | 10 s | 43 |
Fa'aopoopoga fa'asusu ma le mauaina o le fluorescence | 55 | 30s |
A maeʻa ona faʻatulagaina, faʻasaoina le faila ma faʻagasolo le polokalame tali..
4.Results analysis
A mae'a le polokalame, e otometi lava ona fa'asaoina fa'ai'uga, ma su'esu'e le fa'aupuga fa'aafi. Ua seti le pi'o o le fa'alauteleina i le meafaifa'aili.
【Explanation of test results 】
1. Fuafua le aoga o le faʻataʻitaʻiga: Ole faʻatonuga lelei FAM, VIC alalaupapa e tatau ona i ai se faʻaopoopoga masani, ma o le tau Ct e masani ona itiiti ifo i le 34, ae e mafai ona fesuisuiai ona o tulaga faʻavae eseese o meafaifaʻaili eseese. Ole fa'atonuga leaga FAM, VIC alavai e tatau ona le fa'asili Ct. Ua malilie e tatau ona ausia manaoga o loʻo i luga i le taimi e tasi, a leai o lenei suʻega e le aoga.
2. I'uga o le faamasinoga
Auala FAM/VIC | I'uga o le faamasinoga |
Ct<37 | Fa'ata'ita'iga su'ega e lelei |
37≤Ct<40 | O le fa'aupuga o le fa'alauteleina o le S-foliga, ma fa'ata'ita'iga masalomia e mana'omia ona toe su'esu'eina; a fa'apea e tumau le fa'ai'uga o le toe su'esu'ega, e fa'amasinoina e lelei, a leai e leaga |
Ct≥40 Pe Leai se Fa'ateleina | Fa'ata'ita'iga su'ega e le lelei (po'o lalo ifo o le tapula'a pito i lalo ole su'ega pusa) |
Manatua: ( 1) Afai e lelei uma le ala FAM ma le VIC i le taimi e tasi, o le SARS-Cov-2 e faʻamoemoe e lelei.
(2) Afai e lelei le ala o le FAM poʻo le VIC ae le lelei le isi auala, e tatau ona toe fai le suʻega. Afai e lelei i le taimi e tasi, o le a faʻamasinoina o le SARS-Cov-2 lelei, a leai o le a faʻamasinoina o le SARS-Cov-2 leaga.